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    活体成像研讨底物之:Firefly D-Luciferin D-虫荧光素(Luc基因)
    >###nbsp;    作者:ag九游会原创     文章泉源:ag九游会生物    

    活体成像研讨底物之:

    Firefly D-Luciferin D-虫荧光素(Luc基因)

    (活体成像研讨/体外生物发光研讨/转录程度研讨)

     

     

    【紧张提醒】:

    1)见ag九游会ag九游会生物(MKBio)整理的活体成像研讨底物之:腔肠素(Coelenterazine)产品专题

    2)见ag九游会ag九游会生物(MKBio)整理的活体成像研讨底物之:D-荧光素(D-luciferin)产品专题

    3)见ag九游会ag九游会生物(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)罕见题目

    4)见ag九游会ag九游会生物(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)体外利用指南;敬请等待。。。。

    5)见ag九游会ag九游会生物(MKBio)整理的D-荧光素(D-luciferin)体内利用指南;敬请等待。。。。

     

    搜刮要害词:

    Luc reporter gene 陈诉基因;Luciferase 萤火虫荧光素酶;In vivo imaging 活体成像研讨;荧光素酶/ATP程度研讨;陈诉基因质粒;陈诉基因病毒颗粒;萤火虫荧光素;甲虫荧光素;CAS:103404-75-7;

     

    根本形貌:

    D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,广泛用于整个生物技能范畴,分外是体内活体成像技能。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,发生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相干性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研讨植物如巨细鼠体内,之后注入荧光素,经过生物发光成像技能(BLI)来检测光强度变革,从而及时监测疾病开展形态或药物的医治成效等。也可以使用ATP对此反响系统的影响,依据生物发光强度的变革来指示能量或生命体征。

     

    根本使用:

    1)体内活体成像In vivo imaging;荧光素酶标志的肿瘤细胞、干细胞或感染疾病通常注射入研讨植物模子好比巨细鼠内举行研讨,从而对植物模子举行及时和非侵犯性的监测疾病历程和/或药效。

    2)体外研讨,包罗荧光素酶和ATP程度剖析;陈诉基因剖析;高通量测序和种种净化检测。

     

    罕见贸易化范例的差别(荧光素钾,钠,游离酸):

    现在市场上罕见的有三种产品情势,D-荧光素(游离酸),D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品次要差异在于消融特征。

    1)D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲系统内的消融性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。

    2)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)可以十分容易且疾速的溶入水大概缓冲液中,利用利便,溶剂无毒性,分外合适体内实行。配成溶液后的三种产品,在绝大少数使用上都没有本质性的差异。

    3)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)根本上没有差异,次要是利用习气等要素影响。全体来看,钾盐的使用文献分明多于钠盐。

     

    利用办法【体内成像/腹腔注射】

    一.  贮存液制备(Luciferin preparation)

    1.1    将D-荧光素钾盐(或D-荧光素钠盐)冻干粉回至室温,溶于DPBS(无钙/镁)使其终浓度为15mg/ml。

    1.2    用0.22μm滤膜过滤除菌,条件允许现配现用。若单次真实用不完,则分装后置于≤-20℃保管,制止重复冻融。一旦利用,放到4℃冻结,坚持酷寒且避光。


    二.动力学曲线创建(Kinetic curve)

    由于D-荧光素进入体内的生物散布十分疾速且动力学具构造依赖性,因而,研讨职员需正式实行前确定本身植物在D-荧光素注射后的成像收罗最佳工夫。经过创建植物模子的荧光素酶动力学曲线来完成。


    D-荧光素给药的方法有腹腔注射(ip)、静脉注射(iv)或皮下注射(sc),通常给药方法为腹腔和静脉。以下以腹腔注射为例。


    2.1 如下腹腔注射(i.p.)D-荧光素。假如给药前需麻醉小鼠,必要留意此步操纵大概略微延伸动力学(荧光素酶峰值表达工夫)。

    2.2 a)假如在植物坚持苏醒时给药,等候三分钟,之后依照所选办法麻醉植物(气化或注射麻醉)。b)将麻醉后植物置于成像室内,给药后约5min开端第一次照相。

    2.3 关于腹腔注射模子,每5-10min(最长达40-60min)拍一次照以创建荧光素酶表达的动力学曲线。【大少数注射麻醉药继续20-30min,要完成一次完备的动力学研讨大概必要再给一次麻醉药物。利用2%异氟烷气体麻醉安康植物能在活体成像体系如IVIS内宁静安排45min。】

    2.4 依据模子创建的动力学曲线选择最佳工夫点收罗图像。【很多模子研讨标明腹腔或皮下注射后约10-20min到达信号峰值,静脉注射后约2-5min到达信号峰值。】


    三.腹腔注射(i.p.)技能要点

    最佳注射点(Preferred site)

    植物左下腹部(lower left abdominal quadrant)

    针头巨细(Needle size)

    25 gauge,通常与1ml(1 cc)注射器配套利用

    体积(Volume)

    每10g体重小鼠参加100μl 15mg/ml D-荧光素,相称于150mg/kg的给药剂量。【腹腔单次注射1ml无安慰性溶液对植物无任何压力】。

    植物地位(Position of animal):

    手动牢固,背卧位(腹部向上),植物颅(头部)朝下。悄悄摆荡小鼠2-3次使得肠道向下挪动,在下腹地区发明一个空腔。

    注射(Injection):

    Needle should be bevel-side up and slightly angled when entering the abdominal cavity. Penetrate just through abdominal wall (about 4-5mm). The tip of the needle should just penetrate the abdominal wall of the animal’s left lower abdominal quadrant.

     

    使用示例【生归天学发光体内成像】

    Fig. 1 Image illustrates the IVIS spectrum imager and a mouse placed inside the camera box.

     

    Fig. 2 Bioluminescence in vivo imaging. A. Representative luciferase time course (every 2 min) imaging of mice bearing subcutaneous tumors injected with luciferin. B. Graph illustrates the bioluminescence saturation of the whole mouse (displayed in A.) obtained

     

    产品订购:ag九游会生物(MKBio)提供的D-荧光素(D-luciferin)曾经普遍供货给国际外各大研讨所、医院研讨室、生物医药公司,相对口碑产品,零差评,接待一切新老客户征询和选用ag九游会产品。大局部用户只需必要都市购置第二序次三次~~~。ag九游会有才能提供大包装,接待征询,>###QQ:2971634497。

    货号

    产品称号

    规格                 

    代价(元)      

    MX4602-100MG          

    D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

    100mg

    998

    MX4602-500MG

    D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

    500mg

    2500

    MX4602-1G

    D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

    1g

    4500

    MX4603-100MG

    D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

    100mg

    998

    MX4603-500MG

    D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

    500mg

    2500

    MX4603-1G

    D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐)

    1g

    4500

    MX4601-250MG

    D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)     

    250mg

    1800

    MX4601-500MG

    D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

    500mg

    3000

    MX4601-1000MG

    D-Luciferin Firefly, Free Acid D-虫荧光素(游离酸)

    1g

    5800

    MX4604-10MG

    DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

    10mg

    1350

    MX4604-50MG

    DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

    50mg

    5440

     

    留意事变

    1)   ag九游会ag九游会生物(MKBIO)提供一切产品仅作科研用处,请不要用于临床或诊疗用处。

    2)   为了您的宁静和安康,请穿实行服并戴一次性手套操纵。

     

    附录I 种种给药途径和模子植物的发起位点、针头巨细和注射体积

    给药途径           

    仓鼠

    小鼠

    大鼠

    IM肌肉注射

    位点

    体积

    巨细  

    Quadriceps, gluteals

    ≤0.15 ml

    <23 gauge

    Quadriceps

    ≤0.03 ml

    <23 gauge

    Quadriceps, gluteals, triceps

    ≤0.25 ml

    <22 gauge

    IP腹腔注射

    位点

    体积

    巨细

    Lower right quadrant of abdomen

    ≤3 ml

    <21 gauge

    Lower right quadrant of abdomen

    ≤2 ml

    <25 gauge

    Lower right quadrant of abdomen

    ≤5 ml

    <22 gauge

    IV静脉注射

    位点

    体积

    巨细

    Not recommended

    Lateral tail veins

    ≤0.5 ml

    <27 gauge

    Lateral tail or saphenous veins

    ≤2 ml slowly

    <22 gauge

    Intragastric 

    灌胃

    位点

    体积

    巨细

    Stomach

    N/A

    18-22 gauge, 4-4.5cm long, Bulbed feeding needle

    Stomach

    5-10ml/kg

    18-22 gauge, 2-3cm long, Bulbed feeding needle

    Stomach

    5-10ml/kg

    15-18 gauge, 6-8cm long, 

    Bulbed feeding needle or 8 French flexible catheter

    SC皮下注射

    位点

    体积

    巨细

    Neck, back

    ≤3 ml

    <21 gauge

    Neck, back

    ≤1 ml

    <22 gauge

    Neck, back,abdomen

    ≤5 ml

    <21 gauge

     

     

     

     — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBioag九游会一切】

     


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