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Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,泉源于牛胰腺 (冻干粉情势,即用型液体情势,ag九游会生物)
>###nbsp;    作者:ag九游会原创     文章泉源:ag九游会生物    

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I,泉源于牛胰腺

(冻干粉情势,即用型液体情势,ag九游会生物)

 

要害词:

脱氧核糖核酸酶I DNase I;核糖核酸酶 RNase;万能核酸酶 Benzonase;Sigma D5025; Sigma DN25;CAS:9003-98-9;

 

需求配景:

分子生物学实行中,在RNA样品的制备历程中,每每会遭到样品中不行制止存在的DNA的搅扰,为了包管RNA样品的纯度以及满意后续RNA相干研讨的顺遂展开,必要DNase I有针对性的酶解DNA。别的,在卵白成品的消费中好比抗体,重组卵白,细胞裂解这步开释的内含物中撤除卵白外,每每有很高含量的核酸(DNA, RNA),核酸的存在严峻搅扰成品的纯化和活性,为此,使用DNase I和RNase组合方法往复除核酸搅扰,也很须要。另有,在其他的实行好比TUNEL细胞凋亡检测中常用DNase I对细胞样本核酸举行剪切,以失掉实行所需的阳性比较。

 

根本介绍:

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,在大少数细胞和构造中都能发明的一种核酸内切酶,偏好切割临近嘧啶的磷酸二酯键,发生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸(见下图反响流程图),均匀消化产品最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下,DNase I可随机辨认和堵截DNA任一条链上的恣意位点;而在Mn2+存在条件下,DNase I辨认DNA的两条链并在简直相反的位点举行切割。DNase I可水解多种情势DNA,如单链DNA、双链DNA,乃至染色质(其切割速率受组卵白影响)。

脱氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,缩写DNase I,最早从胰腺中分散而来,至今哺乳植物胰腺也是最次要的泉源之一。DNase I以两对二硫键联合的多种糖卵白混淆情势存在。最佳的事情范畴是pH 7-8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可掩护酶使其不被水解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

 

次要使用:

◇   制备不含DNA的RNA样本;

◇   RT-PCR反响前RNA样本内基因组DNA等大概存在DNA净化的去除;

◇   T7,T3,SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除;

◇   DNase I脚印法(DNase I footprinting)研讨DNA-卵白质互相作用;

◇   缺口平移法标志探针用;

◇   制备随机DNA片断文库;

◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性比较;

 

ag九游会(ag九游会生物MKBio)提供的脱氧核糖核酸酶I(DNase I),泉源于牛胰腺,经过亲和色谱纯化所得,不含RNase和卵白酶净化。为了满意产业用户和科研用户的差别使用需求,ag九游会提供冻干粉(差别比活)和即用型液体情势的DNase I。详细信息如下:


一、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉情势,比生机≥2000 Kunit U/mg protein)

1.1 产品特性:

1)   CAS NO:9003-98-9

2)   卵白纯度:≥80%(biuret),色谱纯化

3)   比生机:≥2000Kunit Units/mg protein

4)   生机界说:25℃,pH5.0条件下DNase催化底物DNA,使每毫升每分钟ΔA260增长0.001的变革界说为一个酶生机单元(Kunitz unit)。

5)   激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6)   克制剂:β-巯基乙醇;螯合剂;SDS;肌动卵白;并没有特异性克制DNase I酶活的通用克制剂,好比柠檬酸盐克制Mg2+活化的DNase I,但不克不及影响Mn2+激活的DNase I。

7)   消融性:溶于0.15M NaCl(5mg/ml),无色通明溶液


1.2 订购信息:产品功能媲美Sigma D5025,本品消费至多十年以上,贩卖到国际各大实行室,接待各大产业和科研用户前来征询。>###QQ:2971634497。

产品称号

产品编号

规格         

代价          

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

脱氧核糖核酸酶I,泉源于牛胰腺

MF0401-15KU   

15KU

380

MF0401-50KU

50KU

980


二、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(冻干粉情势,比生机≥500 Kunit U/mg protein)

2.1 产品特性:

8)   CAS NO:9003-98-9

9)   分子量:~31 kDa

10)同义名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶,脱氧核糖核酸酶A

11)  比生机:≥500 Kunit Units/mg protein

12)  生机界说:在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反响缓冲系统中,37℃,10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即为一个生机单元。此反响条件下失掉的一个单元DNase生机约即是一个Kuntiz unit。

13)  激活剂:多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14)  克制剂:EGTA,EDTA,盐离子浓度(>100mM)都能低落DNase活性

15)  热失活:含停止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,处置10min

16)  消融性:溶于缓冲液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)


2.2 订购信息:产品功能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401(≥2,000 Kunit U/mg protein),代价愈加经济。接待征询,>###QQ:2971634497。

产品称号

产品编号

规格 

代价        

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein  

脱氧核糖核酸酶I,泉源于牛胰腺

MF0402-10MG   

10MG     

250

MF0402-50MG

50MG

680


三、脱氧核糖核酸酶I(DNase I)(即用型溶液)

3.1 产品特性:

试剂盒情势提供,此中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 情势提供,酶颠末严厉质控能极好的消化模板;还提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution,节流了试剂配制的工夫,用起来愈加快捷。


3.2 试剂盒包装:

组分编号

组分称号

货号(规格)

MF0405-200U      

MF0405-1000U    

MF0405-A    

DNase I Solution (RNase & Protease-free)     

200U

1000U

MF0405-B

10× Reaction Buffer

200μl

1ml

MF0405-C

10× Stop Solution

200μl

1ml


3.3 利用办法【以RT-PCR反响前RNA样本内DNA净化的去除为例】

1)DNA模板经核酸内切酶线性化,用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于过量无菌去离子水中。

2)往一个RNase-free EP管内顺次参加下列试剂:

RNA样本

1μg             

10× Reaction Buffer

1μl

用DEPC-treated Water增补    

至9μl

DNase I (1U/μl)

1μl

【留意】:假如必要处置较少量的RNA样品,可按比例缩小上述反响系统。条件允许下最好往系统内参加过量RNase克制剂(货号:MF0218-2KU)以避免RNA降解。

3)   37℃孵育30min。

4) 往上述系统内参加1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×,混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【留意】:肯定要先参加10× Stop Solution,然后再加热失活RNase I,不然先加热大概惹起RNA被降解。

5)加热处置后的RNA样品即可间接用作RT-PCR反响用的模板。


3.4  订购信息:即用型试剂盒,科研单元且用量未几用户的首选。接待征询,>###QQ:2971634497。

产品称号

产品编号

规格            

代价             

DNase I Solution (RNase & Protease-free)          

脱氧核糖核酸酶I溶液(无RNase &卵白酶)

MF0405-200U          

200U

198

MF0405-1000U

1000U

848

 

关产品

货号

称号

规格          

MF0402-10MG      

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein      

10MG

MF0401-15KU

Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein

15KU

MF0405-200U

DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液

200U

MF0203-100MG

Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas

100mg

MP1509-25KU

Benzonase Nuclease 万能核酸酶

25KU

MF0201-100MG

Proteinase K, Molecular Biology Grade卵白酶K

100mg

MF0218-2KU

RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小鼠RNA酶克制剂

2KU

MF0404-500ML

DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase ) 

500ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBioag九游会一切】

 

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