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MKBio TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂
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目次号 MF0403-100ML 售价 450.00元
规格100ml 运输温度 冰袋
其他称号总RNA提取试剂 保管温度 2-8℃保管
CAS号N/A 无效期 至多一年
使用总RNA提取 订购数目
产品简介:

TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂


产品要害词:

TRIzol Reagent;酚氯仿抽提;RNase-free H2O; Total RNA 总RNA提取;RNAlater;Invitrogen 15596026;


产品信息

产品称号

产品编号

规格            

代价(元)  

TRIzol Reagent 总RNA抽提试剂   

MF0403-100ML    

100ml

450


产品形貌

TRIzol Reagent是一种即用型且操纵迅捷的总RNA抽提试剂,实用样本普遍,包罗人、植物、动物、酵母或细菌泉源的细胞和构造样本。TRIzol Reagent是一种含酚、异硫氰酸胍和其他专利身分的单相溶液,有利于抽提分子量巨细纷歧的种种RNA范例。TRIzol Reagent可以精良的维持RNA完备性,因能高效克制样本匀浆历程中细胞破坏和细胞组分消融时开释的RNase活性。TRIzol Reagent可以同时处置少量样本,且以优化的方法一步法提取RNA,整个历程可在一小时内完成。


TRIzol Reagent分散的总RNA无卵白质和DNA净化,实用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A)+挑选、体外翻译、RNase掩护剖析和分子克隆等卑鄙实行。


保管与运输办法

保管:2-8℃保管,至多一年无效。

运输:冰袋运输。


留意事变

1)   一切离心管、枪头以及相干溶液都必需无RNase净化。关于塑料成品、玻璃和金属器皿、实行仪器等可利用ag九游会生物的固相RNase扫除剂去除RNase(货号:MF0406-100ML),大概用含0.01% DEPC(货号:MS5513-10ML)的去离子水浸泡留宿,之后高压灭菌、烘干。关于实行溶液可利用ag九游会生物的液相RNase扫除剂(货号:MF0407-1.5ML)来处置或用DEPC处置水(好比:MF0404-500ML)来配制。

2)   对奇怪构造或细胞样本的抽提结果通常优于冻存的构造或细胞,由于构造或细胞冻融历程中大概存在一些RNase开释出来并酶切样品。如果不克不及实时抽提RNA,保举先参加过量TRIzol Reagent,之后裂解样品后再冻存。

3)   TRIzol Reagent含有毒物质,请在操纵历程中留意好防护事情,戴妙手套和护眼罩,制止皮肤打仗。在透风橱内完成操纵,制止呼吸道吸入。

4)  为了您的宁静和安康,请穿实行服并戴一次性手套操纵。


利用办法

1.  必要自行预备的质料

水浴锅或微量恒温仪(Heat block)

异丙醇

75%乙醇

含0.5% SDS的RNase-free水或RNase-free水或DEPC处置水

【可选】RNase-free的糖原(核酸助沉剂)


2.  样本要求

【紧张】:样本搜集后立刻举行RNA分散,或样本搜集后立刻冻存样本并保管在-80℃或液氮中直至RNA抽提。

样本范例

每mlTRIzol Reagent处置的肇始样本量

构造(奇怪构造或保管在RNAlater等波动液内的构造)

50~100mg构造

单层生长的细胞

1×105~1×107单细胞层(35mm培育皿,10cm2)

悬浮生长的细胞

5-10×106个细胞(动动物或酵母泉源)或1×107个  

细胞(细菌泉源)

 

3. 样本预备与分相

3.1 依据肇始质料用TRIzol Reagent裂解和匀浆样本。

◇构造样本

按比例每50~100mg 构造加1ml TRIzol Reagent,之后用符合的办法举行匀浆。通常用50~100mg构造即可取得足量的RNA,满意绝大少数卑鄙实行。参加过量构造或过少TRIzol都容易招致RNA提取失败。

a)关于研钵研磨:将液氮冻存构造,放到研钵中研磨成粉末,之后参加1ml TRIzol,持续研磨至构造完全裂解【研磨要敏捷,最好不要凌驾1min】。b)关于玻璃匀浆器匀浆:参加1ml TRIzol上动手动匀浆构造10~15次。c)关于机器匀浆器:将构造放入塑料管内,将塑料管置于冰浴烧杯内,参加1ml TRIzol,将疏散器头垂直拔出管内与构造间接打仗,设置转速12,000~20,000 rpm,上下挪动试管10~20次,直至构造完全打散,无分明可见大块即可。

◇单层生长的细胞

吸尽培育基,之后往35mm培育皿(10cm2)内参加1ml TRIzol Reagent,摆荡3~5次,再用移液枪上下奏乐3~5次,使其充实裂解。【依照10cm2培育面积参加1ml TRIzol加量。好比:六孔板每孔参加1ml TRIzol,12孔板每孔加0.5ml TRIzol】

◇  悬浮生长的细胞

离心搜集细胞,吸尽上清,每5-10×106个细胞(动动物或酵母泉源)或1×107个细胞(细菌泉源)参加1ml TRIzol Reagent【参加TRIzol前不要洗濯细胞,不然会增长mRNA降解的大概性】。用枪奏乐频频或得当涡旋,使其充实裂解。某些酵母和细菌如裂解不充实,可用匀浆器匀浆,使其完全裂解。

【留意】:样本体积不要凌驾参加TRIzol体积的10%。

 

3.2 特别样本处置【可选】:关于某些富含卵白,多糖或脂肪的样本,经TRIzol Reagent裂解后大概会有不溶物或油脂状漂泊物呈现。此时需12,000g 4℃离心10min,之后汲取廓清的上清液至一新的离心管中。

3.3 室温孵育5min,使得核卵白体完全剖析。

3.4 依照每1ml TRIzol Reagent参加0.2ml 氯仿,盖紧盖子。涡旋混匀或用手猛烈摆荡15s,室温孵育2~3min。

3.5 于12,000g 4℃离心15min。离心后混淆物分为三层:上层酚-氯仿层,两头层,和下层无色的水相层。RNA无一破例的停顿在水相层中。水相层的容量约为所加TRIzol Reagent体积的60%。用枪汲取下层无色水相到一新的离心管中,制止吸就任何两头层或上层身分。

【留意】:假如盼望分散DNA和卵白,请保存两头层和无机层。

 

4.      RNA分散

4.1    RNA的沉淀:a)【可选】假如肇始样本量比力少(<106个细胞或<10mg构造),参加5-10μg RNase-free的糖原作为核酸助沉剂到水相中。b)按每ml后来TRIzol Reagent参加0.5ml异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10min。假如盼望提取microRNA等小RNA,保举-70℃沉淀留宿。c)于12,000g 4℃离心10min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。



4.2    RNA的洗濯:a)按每ml后来TRIzol Reagent参加1ml 75%乙醇重悬沉淀。【注:RNA在75%乙醇中-20℃至多保管1年,4℃至多1周】;b)低速漩涡或颠倒混匀,于7,500g 4℃离心5min,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1秒),警惕吸尽液体。c)操纵的最初,复杂枯燥RNA沉淀(氛围枯燥或真空枯燥5~10min)。不要在真空管里离心枯燥RNA。尤为紧张的是,不克不及让RNA沉淀完全枯燥,不然会极大的低落其可溶性。局部消融的RNA样本的A260/A280比值<1.6。

4.3    RNA的消融:用20~50μl 无RNases水或含0.5% SDS的无RNases水消融RNA,用枪上下奏乐2~3次,使其充实消融,置于-70℃保管或间接用于后续实行,假如后续要做酶切反响请勿用SDS。

【留意】:关于肝脏、胰腺、肾脏等RNase含量较高的构造,沉淀可用100%去离子甲酰胺(货号:MS5515-50ML)消融。

 

5.      RNA产量的测定

5.1    用无RNase水浓缩RNA,之后测定在260nm和280nm的吸取值。

5.2    利用公式A260×浓缩倍数×40= μg RNA/ml。

5.3    盘算A260/A280比值,比值在1.8~2.0之间视为纯度较高,浓度>4 μg/ml的样品实用于分光光度计测定。

5.4    举行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完备性和净化状况。


相干产品

货号

称号

规格            

MF0403-100ML     

TRIzol Reagent总RNA抽提试剂

100ml

MF0404-500ML

DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase )   

500ml

MF0406-100ML

Surface RNase Remover固相RNase扫除剂

100ml

MF0407-1.5ML

Solution RNase Remover液相RNase扫除剂

1.5ml

MF0409-50ML

RNATector Stabilization Solution RNA波动保管液

50ml

MF0410-100ML

RNATector-ICE Frozen Tissue Transition Solution冰冻构造RNA波动液

100ml

MF0412-1G

Glycogen (5mg/ml)核酸助沉剂糖原(5mg/ml)

1ml

MF0413-500UL

Glycogen (20mg/ml)核酸助沉剂糖原(20mg/ml)

500µl

MF0416-100ML

DNase/RNase-Free Water

100ml

MS5515-50ML

Formamide Deionized去离子甲酰胺

50ml


附录1 罕见题目与办理方案

呈现题目

大概原因

办理方案

比预期产量低

样本未充实匀浆或裂解

低落肇始样本量;剪切构造到更小块,确保构造完全浸泡到TRIzol Reagent以到达完全裂解。

沉淀未完全消融

经过重复用枪汲取样品和在50~60℃加热样品的方法来增长消融率

样本被降解

样本未实时处置或搜集后未立刻冻存

样本必需在搜集后立刻处置或立刻冻存

溶液或利用管子未经RNase去除处置

确保实行中所用到的耗材和溶液不受RNase净化

样本制备物没有保管在得当温度下

将RNA样本保管在-70℃。

DNA净化

汲取水相层时带入两头/无机相层

不要实验汲取离心分层后的一切水相层

RNA A260/A280低

在不敷量的TRIzol Reagent内匀浆样品,RNA与卵白质、DNA未完全分散

参加足量的TRIzol Reagent到样本

匀浆后样品未在室温安排5min,RNA与核卵白未完全解离

匀浆后样品需室温安排5min

水相中混有无机相,带有卵白质和DNA的净化

不要实验汲取离心分层后的一切水相层

抽提失掉的RNA沉淀未完全消融

RNA必要完全消融

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBioag九游会一切】

 

 

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